Анализ N-гликанов, выделенных из моноклонального антитела, методом КЭ и МС

Гликозилирование является одной из наиболее важных посттрансляционных модификаций, включающих присоединение остатка гликана к белку. Изменение профиля гликозилирования оказывает сильное влияние на иммуногенность и общую биологическую активность. Определение характеристик гликанов имеет исключительно важное значение для решения задач в области биофармацевтики. Для определения профилей N-гликанов широко используются различные аналитические методики, но при этом возникают серьезные проблемы, связанные с точным обнаружением гликанов при низких концентрациях.

В данной работе продемонстрирован анализ гликанов рекомбинантных моноклональных антител (mAb) с применением капиллярного электрофореза и масс-спектрометрии (КЭ-МС). Данный метод подразумевает ферментативное расщепление гликанов, полученных из mAb, пептид-N-гликозидазой F (PNGase F) с последующей флуоресцентной (тринатриевая соль 8-аминопирин-1,3,6-трисульфоновой кислоты — APTS) маркировкой гликанов, а также анализом гликанов с помощью системы КЭ Agilent 7100, подключенной к квадрупольно-времяпролетному ЖХ-МС Agilent 6520 с точным определением массы. Была проведена идентификация семи гликанов, выделенных из рекомбинантных mAb; и на основании относительного процентного соотношения отдельных остатков гликанов было установлено наличие как основных, так и второстепенных форм модификации гликанов. В данной работе продемонстрировано более быстрое разделение посредством КЭ наряду с низкими пределами обнаружения МС. Результаты указывают на то, что сочетание КЭ-МС является удачной и многообещающей альтернативой ЖХ-МС для определения характеристик гликанов, выделенных из mAb, или гликопротеинов.