Быстрый, точный, чувствительный и воспроизводимый метод анализа аминокислот на ВЭЖХ

Идеальный количественный анализ аминокислот должен сочетать в себе быстроту и чувствительностьс надежностью как реакции дериватизации, так и самого анализа. Эти цели достигаются благодаря автоматизированной предколоночной дериватизации с использованием о-фталевого альдегида (OPA) для первичных аминокислот и 9-флуорометил хлороформиата (FMOC) для вторичных аминокислот с последующим высоконадежным ВЭЖХ анализом. А при использовании хроматографов Agilent 1100/1200 эта процедура становится быстрой, точной, чувствительной и воспроизводимой.

Комбинирование OPA и FMOC реагентов позволяет проводить быструю предколоночную дериватизацию аминокислот для хроматографического анализа. Реакционная смесь помещается в буфер с рН 10,2, что позволяет проводить прямую обработку белков и пептидов подвергшихся кислотному гидролизу. Первичные аминокислоты реагируют с OPA и 3-меркаптопропионовой кислотой (3-MPA). Вторичные аминокислоты не реагируют с OPA, но взаимодействуют с FMOC. Включение 3-MPA в индолы понижает гидрофобность получаемых производных, что позволяет элюировать их с колонки раньше FMOC-производных. Избыток FMOC и продукты его деградации элюируются после последней вторичной аминокислоты и не влияют на анализ. Процесс получения производных быстр и легко автоматизируется при использовании автосамплера Agilent G1329A. А благодаря высокой скорости реакции процесс полностью проходит при комнатной температуре. Автоматизация процедуры обеспечивает высокую степень воспроизводимости результатов. Общее время анализа от "ввода до ввода" может быть менее 14 минут (продолжительность самого разделения 10 мин) на 75-мм колонке и 26 минут (время разделения 16 мин) на 150-мм колонке. Оба варианта обеспечивают высокую производительность анализа.