Анализ пегилированных белков с помощью колонок Agilent AdvanceBio SEC для эксклюзионной хроматографии

Пегилирование терапевтических белков существенно повысило их ценность, поскольку позволило модифицировать их физико-химические и биологические свойства, например, повышать растворимость, снижать иммуногенность, повышать время полужизни и степень защищенности от протеаз. Метод эксклюзионной хроматографии является предпочтительным методом определения примесей с молекулярной массой выше, чем у пегилированных белков. Эксклюзионная хроматография пегилированных белков связана с существенными трудностями: обусловленное полиэтиленгликолем взаимодействие с неподвижной фазой, состоящей из частиц силикагеля, приводит к снижению точности определяемых содержаний, плохой форме пика и нежелательному размытию хвостов пиков. В настоящей методической информации описывается простая и чувствительная методика эксклюзионной хроматографии для определения чистоты пегилированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (ПЭГ-Г-КСФ). Выделение и количественный анализ ПЭГ-Г-КСФ выполнялись с помощью колонки Agilent AdvanceBio SEC, 130 Å размера 7,8 × 300 мм с размером частиц наполнителя 2,7 мкм с применением водной подвижной фазы. Для кривой линейности в диапазоне от 12,5 до 2 000 мкг/мл наблюдался отличный коэффициент корреляции, что свидетельствует о пригодности методики для количественного анализа. Превосходные показатели воспроизводимости времени удерживания и площади пиков, полученные по данной методике, позволяют говорить о ее хорошей применимости. Более того, применение колонки AdvanceBio SEC предоставило возможность выполнять разделение и проводить количественное определение агрегатов, полученных при стресс-испытаниях.